+
معلومات

إنزيمات التقييد: مقص جزيئي


من 1970s ، كان من السهل تحليل جزيء الحمض النووي مع عزل انزيم تقييد.

هذه الانزيمات هي نوكلياز داخلي، أي في الداخل (ومن هنا البادئة إندو- داخل) جزيئات الحمض النووي عن طريق تقطيعها إلى مواقع محددة جيدا.

هذه إنزيمات تنتجها عادة بكتيريا لها خاصية الدفاع عنها من غزو الفيروسات. هذه المواد دائما "كزة" جزيء الحمض النووي في بعض النقاط ، مما يؤدي إلى إنتاج شظايا تحتوي على نصائح لاصقةوالتي يمكن أن ترتبط بالأطراف الأخرى لجزيئات الحمض النووي التي تم قطعها بنفس الإنزيم.

في الهندسة الوراثية ، يساعد الحصول على شظايا الحمض النووي على خلق ، في المختبر (في أنبوب الاختبار أو المختبر) ، جزيئات جديدة ، قص ولصق أجزاء مختلفة من المعلومات.

كان واحدا من أول الانزيمات التقييدية المعزولة EcoRIالتي تنتجها البكتيريا الإشريكية القولونية. هذا الانزيم يتعرف فقط على التسلسل GAATTC ويعمل دائمًا بين G والأول A.

يُعرف موقع "القطع" ، موقع الإنزيم ، بالموقع المستهدف. قد تسأل لماذا هذا الانزيم لا يعمل على الحمض النووي للبكتيريا نفسها؟ هذا ليس بسبب وجود إنزيمات واقية أخرى تمنع عمل إنزيمات التقييد على المادة الوراثية للبكتيريا.

ال إنزيمات التقييد تتعرف على تسلسل الحمض النووي الخاص وتتصرف وفقًا لهاعن طريق تحفيز تدمير رابطة فوسفودستر بين قاعدتين متتاليتين مرتبطتين ببعض القواعد. تقع النيوكليوتيدات التي ينقطع الإنزيم بينها ، أي التي يعزز بينها التحلل المائي ، ضمن تسلسل التعرّف المحددة هذه (انظر الصورة).

يمكن أن يتكون كل جزيء من الحمض النووي من تكرار متعدد لتسلسل GAATTC على كامل طوله. لذلك ، عند ملامسة إنزيم EcoRI ، يمكن تقطيع شرائط DNA "مقطوعة" في عدة أماكن ، مما يولد عدة قطع بأحجام مختلفة.

سنرى أدناه كيف يتم فصل هذه القطع المختلفة من الحمض النووي المشقوق.


فيديو: انزيمات التقطيعالتقييد les enzymes de restriction (كانون الثاني 2021).