معلومة

هل يمكنني تعقيم المعدات لإجراء التجارب بدون الأوتوكلاف؟

هل يمكنني تعقيم المعدات لإجراء التجارب بدون الأوتوكلاف؟



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

إذا لم يكن بإمكاني الوصول إلى الأوتوكلاف ، فهل يمكنني تعقيم أجهزتي في وعاء عادي. إذا كان الأمر كذلك ، ما هو الوقت المطلوب عند حوالي 110 درجة مئوية (قمت بالقياس من الداخل) للتعقيم المناسب؟


بالتأكيد يمكن القيام به. قد يعمل التندال كما تمت مناقشته في زميل المختبر بشكل جيد لموقفك. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فهناك العديد من البدائل القابلة للتطبيق المقترحة.

** التندال: **
تم تطوير تقنية Tyndallisation في منتصف القرن التاسع عشر بواسطة الفيزيائي الإنجليزي ، جون تيندال ، وهي تقنية شائعة الاستخدام من قبل علماء الأحياء الدقيقة في القرن التاسع عشر. أجرى تيندال تجارب على مرق اللحم البقري المغلي لتطوير طريقة لتعقيم السوائل بطريقة آمنة وشاملة.

قاده بحثه إلى المبادئ الأساسية لـ Tyndallisation ، وهي عملية يتم من خلالها إخضاع الوسائط لدمامل قصيرة نسبيًا عند ضغط جوي منتظم. لا تزال هذه الطريقة المباشرة نسبيًا مناسبة للمختبرات الصغيرة أو منشآت البحث التي تتطلب معدات معقمة لجزء من الوقت فقط.

لا يوصى بمحاولة تعقيم العبوات الزجاجية المغلقة بهذه الطريقة ، دون تبطينها بالقطن وتغطيتها برقائق - للسماح للهواء بالهروب دون التعرض للملوثات.

تتضمن العملية غليان السوائل لمدة 10-15 دقيقة قبل تركها لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة وتركها للجلوس لمدة 24 ساعة. كرر هذه العملية ثلاث أو أربع مرات أخرى ، وفي ذلك الوقت يجب أن يكون التعقيم قد حدث.

وبطبيعة الحال ، فقد تقلصت شعبية هذه الطريقة بسبب الحاجة إلى مواصلة العملية لمدة تصل إلى خمسة أيام لتحقيق التعقيم.


1: إعداد الوسائط

تنمو البكتيريا والفطريات على أو في وسط ميكروبيولوجي من أنواع مختلفة. يعتمد الوسيط المستخدم لاستنبات الكائنات الحية الدقيقة على الكائن الدقيق الذي يحاول المرء عزله أو تحديده. يمكن إضافة عناصر غذائية مختلفة إلى الوسط ، مما يجعله أعلى في البروتين أو السكر. غالبًا ما يتم إضافة مؤشرات الأس الهيدروجيني المختلفة لتمييز الميكروبات بناءً على تفاعلاتها الكيميائية الحيوية: قد تتحول المؤشرات إلى لون واحد عندما يكون حمضيًا قليلاً ، ولون آخر عندما يكون قاعديًا قليلاً. قد تكون المكونات المضافة الأخرى عوامل نمو ، ( م) ، ومخازن الأس الهيدروجيني التي تمنع الوسيط من الشرود بعيدًا عن الحياد حيث تستقلب الميكروبات.

في هذا التمرين ، ستقوم بعمل اسم وسائط متعددة الأغراض مرق الصويا trypticase و تريبتيسيز أجار الصويا. هذان الوسيطان - أحدهما سائل والآخر صلب - هما نفس الصيغة بالضبط باستثناء إضافة أجار أجار (أجار أجار حقًا) ، وهو مستخلص من جدران خلايا الطحالب الحمراء.

كانت الطريقة القديمة لصنع الوسائط هي طريقة كتاب الطبخ - إضافة كل مكون شيئًا فشيئًا. الوقت الوحيد الذي يتم القيام به اليوم هو عند إنشاء وسط خاص لنمو كائن حي صعب ، حيث يجب إضافة عوامل نمو معينة ، ومغذيات ، وفيتامينات ، وما إلى ذلك ، بكميات معينة. يُطلق على هذا الوسط اسم وسط محدد كيميائيًا (اصطناعي). لحسن الحظ ، فإن البكتيريا الأكثر شيوعًا التي نريد نموها ستعمل بشكل جيد مع الوسائط التي نستخدمها بشكل شائع في المختبر. يتم شراء بعض الوسائط الخاصة بنا ، ولكن يتم إنتاج معظمها في منطقة الإعداد خلف المعمل. نظرًا لأن هذا النوع من الوسائط يحتوي على بعض المكونات غير المعروفة ، أو في بعض الأحيان كميات غير معروفة ، فإنه يطلق عليه الوسائط المعقدة.

من السهل جدًا إنشاء وسائط معقدة هذه الأيام:

  • يرطب شكل المسحوق من الوسط
  • يحرك ويغلي وسط أجار ليذوب مسحوق أجار (إذا كان صنع وسط أجار بدلاً من وسط مرق)
  • توزيع الوسيط في أنابيب
  • الأوتوكلاف لتعقيم وسائط الأنبوب
  • الأوتوكلاف هو وسط أجار لإنتاج الألواح ثم يصب في أطباق بتري المعقمة

مواد متوافقة وغير متوافقة مع الأوتوكلاف

فيما يلي أمثلة على المواد المتوافقة وغير المتوافقة. هذه ليست قائمة شاملة.

ملاحظة هامة: تعقيم المواد الخطرة بالبخار المضغوط قد ينتج عنه أبخرة سامة أو بيئات متفجرة.

المواد المتوافقة

المواد غير المتوافقة

الثقافات والمخزونات البيولوجية

المواد التي تحتوي على مذيبات أو مواد كيميائية متطايرة أو أكالة أو قابلة للاشتعال

أطباق الثقافة والمواد ذات الصلة

مواد ملوثة بعوامل العلاج الكيميائي أو الأدوية السامة للخلايا

العناصر الصلبة الملوثة (مثل أطراف الماصة والقفازات وأطباق بتري وما إلى ذلك)

مادة تحتوي على مبيض *

تم التخلص من الفيروسات / اللقاحات الحية (بما في ذلك الموهنة)

المواد المسرطنة أو المطفرة (مثل بروميد الإيثيديوم)

البولي بروبلين (PP) والبولي كربونات (PC) البلاستيك

البوليسترين (PS) والبولي إيثيلين (PE) والبولي إيثيلين عالي الكثافة (HDPE) البلاستيك

* تحييد النفايات المحتوية على مواد التبييض بكميات متساوية من 1٪ ثيوسلفات الصوديوم في الماء قبل التعقيم بالبخار المضغوط.

  • يجب فحص وصيانة كل الأوتوكلاف والمعقم بشكل منتظم. سيساعد هذا في ضمان عمل المعدات بشكل صحيح.
  • يجب أن يكون لكل وحدة إجراء تشغيل قياسي مكتوب بتفاصيل كافية للتأكد من أن المشغلين سيستخدمون المعدات بشكل صحيح تختلف الضوابط بين العلامات التجارية ، مع كل منها لها خصائص تحميل فريدة ومتطلبات حجم الحمولة وإعداد الدورة وأنواعها. يجب على المحققين الرئيسيين و / أو مديري المختبرات التأكد من تدريب المستخدمين بشكل صحيح على الأوتوكلاف قيد الاستخدام.
  • يجب اختبار الوحدات بانتظام باستخدام مستحضر تجاري يحتوي على جراثيم Geobacillus stearothermophilus (مؤشر بيولوجي) ، على وجه الخصوص ، أي وحدة في منشأة BSL3.
  • يجب استخدام مؤشرات الشريط (شريط الأوتوكلاف) ذات المؤشرات الكيميائية الحساسة للحرارة في كل حمل للأوتوكلاف. ملاحظة: تتحقق المؤشرات فقط من وصول الأوتوكلاف إلى درجات حرارة التشغيل العادية ولا تشير إلى أن المحتويات تم تسخينها لفترة زمنية مناسبة أو عند الضغط المناسب. لذلك ، لا يمكن استخدام مؤشرات الشريط لإثبات أن الكائنات الحية قد قُتلت بالفعل أثناء تشغيل الأوتوكلاف.
  • احتفظ بسجلات مفصلة عن الاختبارات البيولوجية وتسجيل موازين الحرارة وأعمال الخدمة التي يتم إجراؤها على الوحدة.
  • النفايات أو المواد عالية الكثافة التي تعزل العوامل عن اختراق الحرارة والبخار ليست مناسبة للتعقيم بالبخار. تتطلب العناصر المغطاة بالأوساخ أو الفيلم فترات احتفاظ إضافية. لا يمكن المبالغة في التأكيد على أهمية تنظيف العناصر المراد تعقيمها بشكل صحيح.
  • ضع جميع النفايات المعدية المعقم في أكياس بيولوجية حمراء للتخلص منها.
  • تم تطوير مقطع فيديو تدريبي عبر الإنترنت من قبل جامعة ولاية أريزونا يقدم معلومات السلامة ، وأمثلة عن النفايات التي سيتم تعقيمها ، وإجراءات اختبار الجراثيم التي قد تكون مفيدة لأي مستخدم. الفيديو متاح على: https://www.youtube.com/watch؟v=rM_JTgLSKXk&feature=youtu.be
  • يمكن أن تتسبب النفايات التي يتم تعقيمها في الروائح الكريهة ، وقد يساعد استخدام مزيلات الروائح بالأوتوكلاف في حالة وجود مشكلة عامة في المنطقة.

يجب استخدام معدات الوقاية الشخصية التالية أثناء التحميل والتفريغ:

  • ملابس المختبر القياسية بما في ذلك السراويل الطويلة والأحذية المغلقة من الأمام
  • حماية العين / الوجه
  • القفازات (بما في ذلك القفازات المقاومة للحرارة)
  • معطف المختبر

يعد التغليف المناسب للمواد المعدية واحتوائها أمرًا بالغ الأهمية لتحقيق التعقيم الفعال. السبب الأكثر شيوعًا لفشل التعقيم هو قلة الاتصال بين البخار والكائنات الحية الدقيقة. يجب فصل المواد الجافة عن المواد السائلة لتحقيق التعقيم المناسب.


  • بالنسبة للسوائل ، اختر دائمًا الدورة السائلة أو & quotslow العادم & quot.
  • اسأل مدير المعمل الخاص بك عن الدورة الموصى بها لتعقيم البضائع أو المعدات الجافة.
  • للحصول على أوصاف لدورتي الأوتوكلاف الأساسيتين ، اقرأ نظرة عامة على الأوتوكلاف.

تحتوي هذه الإرشادات على أوقات التعقيم الموصى بها. اتبع دائمًا إجراءات التشغيل المكتوبة في المعمل الخاص بك.

  • البضائع الجافة غير الخطرة: 30 دقيقة من التعقيم بالإضافة إلى 20 دقيقة من وقت التجفيف. قد يلزم زيادة وقت الجفاف للعناصر المغلقة مثل رؤوس الماصة أو الزجاجات ذات الأغطية.
  • السوائل (أضف 10 & ndash20 دقيقة للعناصر المزدحمة):
    • أقل من 500 مل: 30 دقيقة
    • 500 مل & - 1 لتر: 40 دقيقة
    • 2 و - 4 لتر: 55 دقيقة
    • أكثر من 4 لترات: 60 دقيقة

    ملحوظة: سيؤدي تعقيم الأواني الزجاجية الجديدة لمدة 90 دقيقة إلى تلطيفها جزئيًا ، مما يزيد من قوتها.


    التعقيم بالبخار

    من بين جميع الطرق المتاحة للتعقيم ، فإن الحرارة الرطبة على شكل بخار مشبع تحت الضغط هي الأكثر استخدامًا والأكثر موثوقية. التعقيم بالبخار غير سام ، وغير مكلف 826 ، ومبيد للجراثيم ، ومبيد للأبواغ ، ويسخن الأقمشة ويخترقها بسرعة (الجدول 6) 827. مثل جميع عمليات التعقيم ، فإن التعقيم بالبخار له بعض التأثيرات الضارة على بعض المواد ، بما في ذلك تآكل واحتراق مواد التشحيم المرتبطة بقبضات الأسنان 212 تقليل القدرة على نقل الضوء المرتبط بمناظير الحنجرة 828 وزيادة وقت التصلب (5.6 أضعاف) مع الجبس المصبوب 829.

    يتمثل المبدأ الأساسي للتعقيم بالبخار ، كما تم تحقيقه في الأوتوكلاف ، في تعريض كل عنصر لتلامس البخار المباشر عند درجة الحرارة والضغط المطلوبين في الوقت المحدد. وبالتالي ، هناك أربع معايير للتعقيم بالبخار: البخار ، والضغط ، ودرجة الحرارة ، والوقت. البخار المثالي للتعقيم هو البخار الجاف المشبع والمياه الجوفية (نسبة الجفاف & 97٪ ge). يعمل الضغط 813 ، 819 كوسيلة للحصول على درجات الحرارة العالية اللازمة لقتل الكائنات الحية الدقيقة بسرعة. يجب الحصول على درجات حرارة محددة لضمان نشاط مبيد الجراثيم. درجات الحرارة الشائعة للتعقيم بالبخار هي 121 درجة مئوية (250 درجة فهرنهايت) و 132 درجة مئوية (270 درجة فهرنهايت). يجب الحفاظ على درجات الحرارة هذه (ودرجات الحرارة المرتفعة الأخرى) 830 لأدنى حد من الوقت لقتل الكائنات الحية الدقيقة. فترات التعرض الدنيا المعترف بها لتعقيم مستلزمات الرعاية الصحية الملفوفة هي 30 دقيقة عند 121 درجة مئوية (250 درجة فهرنهايت) في معقم إزاحة الجاذبية أو 4 دقائق عند 132 درجة مئوية (270 درجة فهرنهايت) في معقم الفراغ (الجدول 7). في درجات الحرارة الثابتة ، تختلف أوقات التعقيم اعتمادًا على نوع العنصر (على سبيل المثال ، المعدن مقابل المطاط ، والبلاستيك ، والعناصر ذات اللومن) ، وما إذا كان العنصر ملفوفًا أو غير مغلف ، ونوع المعقم.

    النوعان الأساسيان من أجهزة التعقيم بالبخار (الأوتوكلاف) هما الأوتوكلاف بإزاحة الجاذبية ومعقم الفراغ عالي السرعة. في الحالة الأولى ، يتم إدخال البخار في أعلى غرفة التعقيم أو جوانبها ، ولأن البخار أخف من الهواء ، فإنه يدفع الهواء إلى الخروج من قاع الحجرة عبر فتحة التصريف. تُستخدم أجهزة التعقيم بالإزاحة بالجاذبية بشكل أساسي لمعالجة الوسائط المختبرية ، والمياه ، والمنتجات الصيدلانية ، والنفايات الطبية المنظمة ، والمواد غير المسامية التي يكون لأسطحها اتصال بخار مباشر. بالنسبة إلى معقمات الإزاحة بالجاذبية ، يتم إطالة وقت الاختراق في العناصر المسامية بسبب عدم اكتمال إزالة الهواء. يتم توضيح هذه النقطة من خلال إزالة 10 أرطال من النفايات الميكروبيولوجية ، الأمر الذي يتطلب 45 دقيقة على الأقل عند درجة حرارة 121 درجة مئوية لأن الهواء المحبوس المتبقي في حمولة من النفايات يؤخر بشكل كبير نفاذية البخار وكفاءة التسخين. 831 ، 832 معقمات ما قبل الفراغ عالية السرعة تشبه معقمات الإزاحة بالجاذبية باستثناء أنها مزودة بمضخة تفريغ (أو قاذف) لضمان إزالة الهواء من غرفة التعقيم وتحميلها قبل دخول البخار. تتمثل ميزة استخدام مضخة التفريغ في وجود تغلغل فوري للبخار تقريبًا حتى في الأحمال المسامية. يستخدم اختبار Bowie-Dick لاكتشاف تسرب الهواء وعدم كفاية إزالة الهواء ويتكون من مناشف جراحية مطوية مصنوعة من القطن بنسبة 100٪ نظيفة ومجهزة مسبقًا. يجب وضع ورقة اختبار من نوع Bowie-Dick المتاحة تجارياً في وسط العبوة. يجب وضع عبوة الاختبار أفقيًا في الجزء الأمامي والسفلي من رف المُعقم ، بالقرب من الباب وفوق البالوعة ، في حجرة فارغة بخلاف ذلك وتشغيلها عند 134 درجة مئوية لمدة 3.5 دقيقة. 813 ، 819 يستخدم الاختبار كل يوم معقم بخاري من النوع الفراغي ، قبل أول تحميل معالج. سوف يتداخل الهواء الذي لم يتم إزالته من الحجرة مع ملامسة البخار. تم تصميم عبوات اختبار صغيرة يمكن التخلص منها (أو أجهزة تحدي العملية) لتحل محل كومة مناشف الجراحة المطوية لاختبار فعالية نظام التفريغ في جهاز التعقيم السابق للفراغ. تم تصميم هذه الأجهزة 833 لمحاكاة المنتج المراد تعقيمه وتشكيل تحدٍ محدد لعملية التعقيم. & rdquo 819 ، 834 يجب أن تكون ممثلة للحمل وتحاكي التحدي الأكبر للحمل. 835 أداء فراغ المعقم مقبول إذا أظهرت الصفيحة داخل عبوة الاختبار تغيرًا موحدًا في اللون. يتسبب الهواء المحبوس في ظهور بقعة على ورقة الاختبار ، بسبب عدم قدرة البخار على الوصول إلى المؤشر الكيميائي. إذا فشل جهاز التعقيم في اختبار Bowie-Dick ، ​​فلا تستخدمه حتى يتم فحصه بواسطة أفراد صيانة جهاز التعقيم واجتياز اختبار Bowie-Dick. 813 ، 819 ، 836

    تصميم آخر في التعقيم بالبخار هو عملية نبضية بضغط تدفق البخار ، والتي تزيل الهواء بسرعة عن طريق التبديل المتكرر بين تدفق البخار ونبض الضغط فوق الضغط الجوي. يتم إزالة الهواء بسرعة من الحمولة كما هو الحال مع جهاز التعقيم السابق ، لكن تسرب الهواء لا يؤثر على هذه العملية لأن البخار الموجود في حجرة التعقيم يكون دائمًا أعلى من الضغط الجوي. درجات حرارة وأوقات التعقيم النموذجية هي 132 درجة مئوية إلى 135 درجة مئوية مع وقت تعريض من 3 إلى 4 دقائق للأحمال والأدوات المسامية. 827 ، 837

    مثل أنظمة التعقيم الأخرى ، يتم مراقبة دورة البخار بواسطة أجهزة مراقبة ميكانيكية وكيميائية وبيولوجية. عادةً ما تتم مراقبة أجهزة التعقيم بالبخار باستخدام نسخة مطبوعة (أو بيانياً) عن طريق قياس درجة الحرارة والوقت عند درجة الحرارة والضغط. عادة ، يتم لصق المؤشرات الكيميائية على الخارج ودمجها في العبوة لمراقبة درجة الحرارة أو الوقت ودرجة الحرارة. يتم مراقبة فعالية التعقيم بالبخار بمؤشر بيولوجي يحتوي على جراثيم Geobacillus stearothermophilus (سابقا Bacillus stearothermophilus). تعتبر نتائج اختبار البوغ الإيجابية حدثًا نادرًا نسبيًا 838 ويمكن أن تعزى إلى خطأ المشغل أو عدم كفاية توصيل البخار أو 839 أو عطل في المعدات.

    تُستخدم المعقمات البخارية المحمولة (التي توضع على الطاولة) في العيادات الخارجية وطب الأسنان والعيادات الريفية. 840 هذه المعقمات مصممة للأدوات الصغيرة ، مثل الحقن تحت الجلد والإبر وأدوات طب الأسنان. يجب مراقبة قدرة جهاز التعقيم على الوصول إلى المعايير الفيزيائية اللازمة لتحقيق التعقيم بواسطة مؤشرات ميكانيكية وكيميائية وبيولوجية.

    أقدم عامل معروف لتعطيل الكائنات الحية الدقيقة هو الحرارة. قيم D (الوقت لتقليل السكان الأحياء بنسبة 90٪ أو سجل واحد10) تسمح بإجراء مقارنة مباشرة للمقاومة الحرارية للكائنات الحية الدقيقة. نظرًا لأنه يمكن تحديد قيمة D عند درجات حرارة مختلفة ، يتم استخدام رمز منخفض لتعيين درجة حرارة التعرض (على سبيل المثال ، D121 ج). د121 ج- قيم Geobacillus stearothermophilus تستخدم لمراقبة عملية التعقيم بالبخار تتراوح من دقيقة إلى دقيقتين. تحتوي البكتيريا والخمائر والفطريات المقاومة للحرارة على نسبة منخفضة من D121 ج القيم التي لا يمكن قياسها تجريبياً. 841

    تدمر الحرارة الرطبة الكائنات الحية الدقيقة عن طريق التخثر الذي لا رجعة فيه وتمسخ الأنزيمات والبروتينات الهيكلية. لدعم هذه الحقيقة ، فقد وجد أن وجود الرطوبة يؤثر بشكل كبير على درجة حرارة تخثر البروتينات ودرجة الحرارة التي يتم فيها تدمير الكائنات الحية الدقيقة.


    طرق التعقيم المختلفة المستخدمة في المختبر

    يمكن تحقيق التعقيم من خلال مزيج من الحرارة والمواد الكيميائية والإشعاع والضغط العالي والترشيح مثل البخار تحت الضغط والحرارة الجافة والأشعة فوق البنفسجية ومعقمات بخار الغاز وغاز ثاني أكسيد الكلور وما إلى ذلك. تقنيات التعقيم الفعالة ضرورية للعمل في المختبر والإهمال من هذا يمكن أن يؤدي إلى عواقب وخيمة ، بل قد يكلف الحياة.

    إذن ما هي أكثر طرق التعقيم شيوعًا في المختبر ، وكيف تعمل؟ واصل القراءة…

    طريقة الحرارة: هذه هي الطريقة الأكثر شيوعًا للتعقيم. تستخدم الحرارة لقتل الميكروبات في المادة. مدى التعقيم يتأثر بدرجة حرارة الحرارة ومدة التسخين. على أساس نوع الحرارة المستخدمة ، يتم تصنيف طرق الحرارة إلى:

    (ط) التعقيم بالحرارة الرطبة / بالبخار - في معظم المعامل ، هذه طريقة مستخدمة على نطاق واسع والتي يتم إجراؤها في الأوتوكلاف .. تستخدم الأوتوكلاف البخار المسخن إلى 121-134 درجة مئوية تحت الضغط. هذه طريقة فعالة للغاية تقتل / تلغي تنشيط جميع الميكروبات والجراثيم البكتيرية والفيروسات. يقتل التعقيم بالبخار الميكروبات عن طريق التحلل المائي وتجلط البروتينات الخلوية ، والذي يتم تحقيقه بكفاءة عن طريق الحرارة الشديدة في وجود الماء. تأتي الحرارة الشديدة من البخار. يتمتع البخار المضغوط بدرجة حرارة كامنة عالية وعند درجة حرارة 100 درجة مئوية ، فإنه يحمل 7 أضعاف حرارة الماء في نفس درجة الحرارة. بشكل عام ، يمكن مقارنة أجهزة الأوتوكلاف مع قدر الضغط النموذجي المستخدم في الطهي باستثناء السمة المتمثلة في إزالة كل الهواء تقريبًا من الأوتوكلاف قبل بدء عملية التسخين. تشمل تقنيات التعقيم بالحرارة الرطبة الغليان والبسترة.

    (2) التعقيم الحراري الجاف - في هذه الطريقة ، تتعرض العينات التي تحتوي على بكتيريا لدرجات حرارة عالية إما عن طريق اللهب أو الحرق أو فرن الهواء الساخن. يستخدم اللهب للأجهزة المعدنية مثل الإبر ، والمشارط ، والمقص ، وما إلى ذلك. يستخدم الحرق بشكل خاص لتلقيح الحلقات المستخدمة في مزارع الميكروبات. يتم تسخين الطرف المعدني للحلقة إلى درجة حرارة حمراء على اللهب. فرن الهواء الساخن مناسب للمواد الجافة مثل المساحيق ، بعض الأجهزة المعدنية ، الأواني الزجاجية ، إلخ.

    الترشيح هي أسرع طريقة لتعقيم المحاليل بدون تسخين. تتضمن هذه الطريقة التصفية بحجم مسام أصغر من أن تمر الميكروبات من خلاله. بشكل عام ، تستخدم المرشحات التي يبلغ قطر مسامها 0.2 ميكرون لإزالة البكتيريا. المرشحات الغشائية هي المرشحات الأكثر شيوعًا المستخدمة فوق المرشحات الملبدة أو السيتز أو الشمعية. وتجدر الإشارة إلى أن الفيروسات والعاثية أصغر بكثير من البكتيريا ، لذا فإن طريقة الترشيح غير قابلة للتطبيق إذا كانت هذه هي الشغل الشاغل.

    التعقيم الإشعاعي:تتضمن هذه الطريقة تعريض المواد المعبأة للإشعاع (الأشعة فوق البنفسجية والأشعة السينية وأشعة جاما) للتعقيم. الفرق الرئيسي بين أنواع الإشعاع المختلفة هو اختراقها وبالتالي فعاليتها. تتميز الأشعة فوق البنفسجية باختراق منخفض وبالتالي فهي أقل فعالية ، ولكنها آمنة نسبيًا ويمكن استخدامها لتعقيم منطقة صغيرة. تتمتع الأشعة السينية وأشعة جاما بقدرة اختراق أكبر ، وبالتالي فهي أكثر فاعلية في التعقيم على نطاق واسع. ومع ذلك ، فهو أكثر خطورة وبالتالي يحتاج إلى عناية خاصة. يتم استخدام الأشعة فوق البنفسجية بشكل روتيني لتعقيم الأجزاء الداخلية لخزانات السلامة البيولوجية بين الاستخدامات. تستخدم الأشعة السينية في تعقيم العبوات الكبيرة والأحمال من الأجهزة الطبية. يشيع استخدام إشعاع جاما لتعقيم المعدات الطبية التي تستخدم لمرة واحدة ، مثل المحاقن والإبر والقنيات ومجموعات الحقن الوريدي والطعام.

    الطريقة الكيميائية تعقيم: توفر التسخين طريقة موثوقة للتخلص من جميع الميكروبات ، ولكنها ليست مناسبة دائمًا لأنها قد تتلف المادة المطلوب تعقيمها. في هذه الحالة ، يتم استخدام الطرق الكيميائية للتعقيم والتي تتضمن استخدام السوائل الضارة والغازات السامة دون التأثير على المادة. التعقيم فعال باستخدام الغازات لأنها تخترق المواد بسرعة مثل البخار. هناك عدد قليل من المخاطر ، وفرص الانفجار وعوامل التكلفة التي يجب أخذها في الاعتبار.

    الغازات شائعة الاستخدام للتعقيم هي مزيج من أكسيد الإيثيلين وثاني أكسيد الكربون. هنا يضاف ثاني أكسيد الكربون لتقليل فرص حدوث انفجار. غاز الأوزون هو خيار آخر يؤكسد معظم المواد العضوية. يعد بيروكسيد الهيدروجين وثاني أكسيد النيتروجين ومحاليل الجلوتارالدهيد والفورمالديهايد والفثالالدهيد وحمض البيراسيتيك أمثلة أخرى على المواد الكيميائية المستخدمة في التعقيم. الإيثانول و IPA جيدان في قتل الخلايا الميكروبية ، لكن ليس لهما تأثير على الجراثيم.


    اسأل خبيرًا: معدات التعقيم

    سأقوم بزراعة البكتيريا الموجودة في الزبادي ، وأنا أتساءل كيف يمكنني تعقيم أقراص المرشح التي أستخدمها لاختبار فعالية مضادات الميكروبات دون استخدام الأوتوكلاف. بالنسبة للأواني المعدنية ، أخطط لتنظيفها ببساطة بالكحول المحمر ، لكنني لست متأكدًا مما إذا كان يمكن القيام بذلك باستخدام ورق الترشيح. يرجى ملاحظة أنه لا يمكنني الوصول إلى مختبر فاخر في الوقت الحالي.

    أتساءل أيضًا عما إذا كانت البكتيريا التي تنمو مباشرة من اللبن ستنمو بطريقة موحدة وليس في عدة مستعمرات صغيرة؟ إليك رابط الطريقة التي أستخدمها:
    http://www.sciencebuddies.org/science-f. p072.shtml

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة جكسشراندت & raquo الثلاثاء 15 مارس 2016 الساعة 12:39 مساءً

    مرحبًا Mad_Scientist! أسهل طريقة لحل مشكلتك هي شراء أقراص فلتر معقمة. خلاف ذلك ، يمكنك نقع 70 ٪ من كحول الأيزوبروبيل أو 70 ٪ من الإيثانول ثم تركه يجف. ومع ذلك ، فإن المشكلة في هذا النهج هي أنك بحاجة إلى بيئة معقمة حتى تجف الأقراص. وإلا فقد تتلوث الأقراص بالبكتيريا في الوقت الذي تجف فيه. لذلك ، إذا قررت اتباع هذا الأسلوب ، فيجب عليك مسح كل شيء في المنطقة المجاورة لأقراص المرشح باستخدام 70٪ كحول أيضًا.

    للإجابة على سؤالك الثاني ، تعتمد كثافة المستعمرات على تركيز البكتيريا. إذا كانت البكتيريا موجودة بتركيز منخفض في الزبادي ، فقد ترى عددًا قليلاً من المستعمرات تنمو في الحجم بمرور الوقت. يتم إنتاج كل مستعمرة بواسطة بكتيريا واحدة. إذا كان الزبادي يحتوي على نسبة عالية من البكتيريا ، فقد ترى طبقة من البكتيريا.

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة عالم مجنون & raquo الثلاثاء 15 مارس 2016 الساعة 1:04 مساءً

    شكرا على الرد السريع!

    لقد أجريت للتو بعض الأبحاث ويبدو أن الزبادي يحتوي على ما بين 3 مليارات cfu / ml إلى 10 مليار cfu / ml. هل يعتبر هذا ما يكفي من البكتيريا لإنتاج فيلم جميل؟ إذا لم يكن كذلك ، فهل هناك طريقة لجعل البكتيريا تنمو في فيلم؟ سيكون هذا مهمًا لأنني أستخدم طريقة الانتشار لتحديد قدرة المطهر.

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة تم حذفه - 284605 & raquo الثلاثاء 15 مارس 2016 9:20 مساءً

    أعتقد أنه طالما قمت بتغطية الطبق بالكامل بقليل من الزبادي على الأقل ، فستحصل على ما يسمى & quotlawn & quot من البكتيريا (النمو المستمر في بعدين بدلاً من العديد من المستعمرات الصغيرة).

    إذا لم تتمكن من العثور على أقراص معقمة ، فيمكنك أيضًا تجربة وضعها في الميكروويف لمدة 30-60 ثانية (كن حذرًا - لست متأكدًا من مدى قابليتها للاشتعال)!

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة عالم مجنون & raquo الثلاثاء 15 مارس 2016 الساعة 10:03 مساءً

    شكرا! سأفكر في استخدام طريقة الإيثانول أو الميكروويف. إذا كنت أستخدم طريقة الميكروويف ، فهل يجب أن أنقع الأقراص في الماء أولاً أم يجب أن أقوم بلفها بورق الألمنيوم؟ (أنا قلق نوعًا ما من أن الأقراص سوف تحترق) أتساءل أيضًا إلى أي مدى يجب أن أضع كل قرص مرشح عن بعضه البعض. أفكر في وضعها على بعد حوالي 3 سم من بعضها البعض ولكني لست متأكدًا تمامًا لأنني لم أجد إجراءً دقيقًا لذلك.

    سؤال سريع آخر: هل يجب أن أخفف اللبن قبل دهنه على الأطباق؟ قال الإجراء الأولي لإجراء تخفيف بنسبة 50:50.

    شكرا للمساعدة!
    عالم مجنون

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة تم حذفه - 284605 & raquo الثلاثاء 15 مارس 2016 الساعة 11:34 مساءً

    لا تضع ورق القصدير في الميكروويف. هذا سيبدأ حريق!

    يجب أن يكون ترطيب الأقراص والقنابل النووية لمدة 30 ثانية على ما يرام ، على الرغم من أن كل ما تشتريه من المحتمل أن يكون عقيمًا على أي حال! يجب أن يكون الغمر بالإيثانول ثم السماح للأقراص بالجفاف تحت وعاء أو أي مساحة نظيفة أخرى جيدًا أيضًا.

    ما نوع العوامل المضادة للميكروبات التي تستخدمها؟ وضع

    من المحتمل أن يكون 3 أقراص / لوحة على شكل مثلث (لزيادة المسافة بينها) على ما يرام ، ولكن الرهان الأكثر أمانًا هو وضع قرص واحد في وسط كل لوحة. يعتمد فقط على عدد اللوحات التي لديك.

    الشيء نفسه ينطبق على مخفف الزبادي. سأختبر مجموعة من التخفيفات (على سبيل المثال ، غير مخفف ، 75٪ ، 50٪ ، 25٪ زبادي) لمعرفة أيهما يعطي أفضل عشب بكتيري قبل إضافة الأقراص. إذا لم يكن لديك أطباق كافية للقيام بكل هذا ، فسأجرب مزيج الزبادي المقترح بنسبة 50٪. كان يجب اختبار هذه التجارب ، لذلك تم اقتراح هذه النسبة لسبب!

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة عالم مجنون & raquo الأربعاء 16 مارس 2016 9:05 مساءً

    شكرا على النصيحة! لقد قمت بتعقيم أقراص المرشح اليوم! الآن أنا فقط أتساءل ، إذا كنت سأقوم بتعقيم المعدات الزجاجية والمعدنية ، هل يجب أن أغليها ، أو أخبزها ، أو ببساطة امسحها ببعض الكحول؟ أريد التخلص من أكبر قدر من البكتيريا ، ولست متأكدًا من الطريقة الأكثر فعالية.

    بالمناسبة ، سأذهب مع 75٪ مخفف الزبادي.

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة ncarter79 & raquo الخميس 17 مارس 2016 7:11 صباحًا

    لو كنت مكانك ، كنت سأمسحهم بالكحول. أنا أعمل في مختبر علم الأحياء الدقيقة والمسح بالكحول هو بالضبط الطريقة التي أنظف بها الملاعق.

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة عالم مجنون & raquo الخميس 17 مارس 2016 10:39 مساءً

    أنا فقط أتساءل عما إذا كانت هناك طريقة لتسريع نمو بكتيريا الزبادي لأنني قرأت للتو أن الأمر يستغرق حوالي 6 أيام. لقد حاولت للتو احتضان الأطباق في درجات حرارة عالية ، لكن منذ أن استخدمت ألواح الجيلاتين ، ذاب الوسيط ببساطة. شكرا للمساعدة!

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة فارمامان & raquo الأحد 20 مارس 2016 6:26 مساءً

    لنمو البكتيريا ، سأكون صبورًا! من المحتمل أن يؤدي رفع درجة الحرارة إلى حد كبير إلى قتل الخلايا ، وسيذيب الوسط الذي تنمو عليه. بخلاف منحهم درجة حرارة مثالية ووسطًا غنيًا بالمغذيات ، ليس هناك الكثير مما يمكنك القيام به لتسريع نموهم.

    إعادة: معدات التعقيم

    نشر بواسطة كريستين جنسن & raquo الإثنين 21 آذار (مارس) 2016 الساعة 12:40 صباحًا


    طرق تعقيم الوسائط والهواء (مع رسم بياني)

    يمكن تعقيم المفاعل الحيوي عن طريق تدمير الكائنات الحية عن طريق الحرارة / المواد الكيميائية / الإشعاع أو أحيانًا عن طريق الإجراءات الفيزيائية مثل الترشيح.

    تتم مناقشة تعقيم الوسائط والهواء أدناه:

    1. تعقيم وسائل الإعلام الثقافية:

    تساهم مكونات وسط الاستزراع والماء والأوعية في التلوث بالخلايا والجراثيم النباتية. يجب أن تكون الوسائط خالية من التلوث قبل استخدامها في التخمير. يتم تعقيم الوسائط بشكل أكثر شيوعًا عن طريق تطبيق الحرارة وبدرجة أقل بوسائل أخرى (الطرق الفيزيائية والمعالجة الكيميائية والإشعاع).

    التعقيم الحراري:

    الحرارة هي تقنية التعقيم الأكثر استخدامًا. تعتبر جودة وكمية التلوث (أي نوع وحمل الكائنات الدقيقة) ، وتكوين الوسائط ودرجة الحموضة وحجم الجسيمات المعلقة من العوامل المهمة التي تؤثر على نجاح التعقيم الحراري.

    بشكل عام ، يتم تدمير الخلايا النباتية عند درجة حرارة منخفضة في وقت قصير (حوالي 60 درجة مئوية في 5-10 دقائق). ومع ذلك ، فإن تدمير الجراثيم يتطلب درجة حرارة أعلى ووقتًا أطول نسبيًا (حوالي 80 درجة مئوية لمدة 15-20 دقيقة). تعتبر جراثيم Bacillus stearothermophilus هي الأكثر مقاومة للحرارة. في الواقع ، يتم استغلال هذا الكائن الحي لاختبار عقم معدات التخمير.

    الطرق الفيزيائية:

    الأساليب الفيزيائية مثل الترشيح والطرد المركزي والامتزاز (لمبادلات الأيونات أو الكربون المنشط) قيد الاستخدام. من بين هؤلاء ، يتم استخدام الترشيح على نطاق واسع. بعض المكونات (الفيتامينات ، ومكونات الدم ، والمضادات الحيوية) لوسط المزرعة قابلة للتأثر بالحرارة ، وبالتالي يتم تدميرها بالتعقيم الحراري. يتم إذابة هذه المكونات من الوسط تمامًا (ضرورية للغاية وإلا ستتم إزالتها مع الكائنات الحية الدقيقة) ثم تعقيمها بالترشيح.

    هناك نوعان من قيود تقنية الترشيح:

    1. تطبيق الضغط العالي في الترشيح غير مناسب للصناعات.

    2. قد تفقد بعض مكونات الوسائط من الوسائط أثناء الترشيح.

    في بعض الأحيان ، يتم استخدام مزيج من الترشيح والتعقيم الحراري. على سبيل المثال ، يتم ترشيح المياه المستخدمة في تحضير الوسائط بينما يتعرض محلول المغذيات المركز للتعقيم الحراري. يتم الآن إضافة الماء المصفى للتخفيف المناسب للوسائط. لا تُستخدم الطرق الكيميائية (باستخدام المطهرات) وإجراءات الإشعاع (باستخدام الأشعة فوق البنفسجية والأشعة السينية والأشعة السينية) بشكل شائع لتعقيم الوسائط.

    تخضع وسائط الاستنبات للتعقيم عند 121 درجة مئوية بأحجام دفعات ، في المفاعل الحيوي. يمكن إجراء التعقيم الدفعي عن طريق حقن البخار في الوسط (الطريقة المباشرة) أو حقن البخار في الملفات الداخلية (طريقة غير مباشرة). بالنسبة للتعقيم المباشر ، يجب أن يكون البخار نقيًا وخاليًا من جميع الإضافات الكيميائية (التي تأتي عادةً من عملية التصنيع بالبخار).

    هناك نوعان من عيوب التعقيم الدفعي:

    1. الإضرار بوسائل الإعلام الثقافية:

    من الشائع حدوث تغيرات في المغذيات وتغير الأس الهيدروجيني وتغير لون وسط الاستنبات.

    2. ارتفاع استهلاك الطاقة:

    يستغرق الأمر بضع ساعات (2-4 ساعات) لكامل محتويات المفاعل الحيوي للوصول إلى درجة الحرارة المطلوبة (أي 120 درجة مئوية). 20-60 دقيقة أخرى لعملية التعقيم الفعلية ، يتبعها التبريد لمدة 1-2 ساعة. تتضمن كل هذه العملية إهدارًا للطاقة ، وبالتالي فإن التعقيم الدفعي مكلف للغاية.

    التعقيم المستمر:

    يتم إجراء التعقيم المستمر عند 140 درجة مئوية لفترة زمنية قصيرة جدًا تتراوح من 30 إلى 120 ثانية. (هذا على عكس التخمر الدفعي الذي تم إجراؤه عند 121 درجة مئوية لمدة 20-60 دقيقة). يعتمد هذا على مبدأ أن الوقت اللازم لقتل الكائنات الحية الدقيقة يكون أقصر بكثير عند درجة حرارة أعلى. يتم التعقيم المستمر عن طريق الحقن المباشر للبخار أو بواسطة المبادلات الحرارية.

    في كلتا الحالتين ، يتم رفع درجة الحرارة بسرعة كبيرة إلى 140 درجة مئوية ، ويتم الحفاظ عليها لمدة 30-120 ثانية. يوضح الشكل 19.7 مراحل عملية التعقيم المستمر ودرجات الحرارة المقابلة لها. المراحل المختلفة - المبادل ، السخان ، وحدة صيانة الحرارة ، استعادة الحرارة المتبقية ، التبريد والتخمير.

    في عملية التعقيم المستمر ، يتم استخدام 3 أنواع من المبادلات الحرارية. يقوم المبادل الحراري الأول برفع درجة الحرارة إلى 90-1 20 درجة مئوية خلال 20-30 ثانية. يقوم المبادل الثاني برفع درجة الحرارة إلى 140 درجة مئوية ويحتفظ بها لمدة 30-120 ثانية. يقوم المبادل الحراري الثالث بخفض درجة الحرارة عن طريق التبريد في الـ 20-30 ثانية القادمة. يعتمد الوقت الفعلي المطلوب للتعقيم على حجم الجسيمات العالقة. كلما كان الحجم أكبر ، كلما زاد الوقت المطلوب.

    الميزة الرئيسية للتعقيم المستمر هي توفير حوالي 80-90٪ من الطاقة. ومع ذلك ، فإن القيد هو أن بعض المركبات الموجودة في الوسط المترسب (على سبيل المثال ، فوسفات الكالسيوم ، أكسالات الكالسيوم) بسبب الاختلافات العالية جدًا في درجات الحرارة التي تحدث في وقت قصير جدًا بين التعقيم والتبريد. تصبح وسائط المزرعة المحتوية على النشا لزجة في التعقيم المستمر وبالتالي لا يتم استخدامها.

    2. تعقيم الهواء:

    بشكل عام ، تتم عمليات التخمير الصناعية تحت تهوية قوية ومستمرة. للتخمير الفعال ، يجب أن يكون الهواء معقمًا تمامًا وخاليًا من جميع الكائنات الدقيقة والخجولة والجزيئات المعلقة. هناك تباين كبير في كمية الجسيمات المعلقة والميكروبات في الهواء الجوي الخارجي.

    قد تتراوح الكائنات الحية الدقيقة من 10-2000 / م 3 بينما قد تكون الجسيمات المعلقة 20-100،00 / م 3. من بين الكائنات الحية الدقيقة الموجودة في الهواء ، تهيمن الجراثيم الفطرية (50٪) والبكتيريا سالبة الجرام (40٪). Air or other gases can be sterilized by filtration, heat, UV radiation and gas scrubbing. Among these, heat and filtration are most commonly used.

    (a) Air sterilization by heat:

    In the early years, air was passed over electrically heated elements and sterilized. But this is quite expense, hence not in use these days.

    (b) Air sterilization by filtration:

    Filtration of air is the most commonly used sterilization in fermentation industries.

    When the air is passed through a glass wool containing depth filters the particles are trapped and removed (Fig. 19.8). This filtration technique primarily involves physical effects such as inertia, blocking, gravity, electrostatic attraction and diffusion. Glass wool filters can be subjected to steam sterilization and reused. But there is a limitation in their reuse since glass wool shrinks and solidifies on steam sterilization. In recent years, glass fiber filter cartridges (that do not have the limitations of glass wool filter) are being used.


    4 Main Methods of Sterilization | Organisms | Microbiology

    Among the various methods followed for controlling microbial activity, the best by far is sterilization as it eliminates all the microbes. Sterilization is achieved by the following methods: 1. Physical Methods 2. Radiation Methods 3. Ultrasonic Methods 4. Chemical Methods.

    1. Physical Methods:

    Physical methods of sterilization include killing of microbes by applying moist heat as in steaming or dry heat as in a hot air oven or by various methods of filtration to free the medium of microbes. We shall study each one of them.

    أنا. Physical Control with Heat:

    The Citadel is novel by A.J. Cronin that follows the life of a young British physician, beginning in the 1920s. Early in the story the physician, Andrew Manson, begins his practice in a small coal­mining town in Wales. Almost immediately, he encounters an epidemic of typhoid fever.

    When his first patient dies of the disease, Manson becomes terribly distraught. However, he realizes that the epidemic can be halted, and in the next scene, he is tossing all of the patient’s bed-sheets, clothing, and personal effects into a huge bonfire.

    The killing effect of heat on microorganisms has long been known. Heat is fast, reliable, and relatively inexpensive, and it does not introduce chemicals to a substance, as disinfectants sometimes do. Above maximum growth temperatures, biochemical changes in the cell’s organic molecules result in its death.

    These changes arise from alterations in enzyme molecules or chemical breakdowns of structural molecules, especially in the cell membranes. Heat also drives off water, and since all organisms depend on water, this loss may be lethal.

    The killing rate of heat may be expressed as a function of time and temperature. For example, tubercle bacilli are destroyed in 30 minutes at 58°C, but in only 2 minutes at 65°C, and in a few seconds at 72°C. Each microbial species has a thermal death time (TDT), the time necessary for killing it at a given temperature. Each species also has a thermal death point (TDT), the temperature at which it dies in a given time.

    In this method temperature is kept constant and time necessary to kill the cells is determined. The term thermal death point is no more practice. Since a particular temperature cannot be lethal all the times and also for all kinds of microorganisms.

    Recently the heat sensitivity is defined using the term D value. D value is the exposure time at a given temperature required to reduce the number of viable organisms by 90%. Mathematically, it is equal to the reciprocal of the slope of the survivor curve or survivor curve to traverse one log cycle. D values can be used to determine the relative heat sensitivity of a microorganism to different temperature by calculation.

    The z value is the temperature change needed to reduce the D value by one log cycle when log D is plotted against temperature. The F value is the D value at 250°F. These measurements are particularly important in the food industry, where heat is used for preservation.

    In determining the time and temperature for microbial destruction with heat, certain factors bear consideration. One factor is the type of organism to be killed. For example, if materials are to be sterilized, the physical method must be directed at bacterial spores. Milk, however, need not be sterile for consumption, and heat is therefore aimed at the most resistant vegetative cells of pathogens.

    Another factor is the type of material to be treated. Powder is subjected to dry heat rather than moist heat, because moist heat will leave it soggy. Saline solutions, by contrast, can be sterilized with moist heat but are not easily treated with dry heat.

    Other factors are the presence of organic matter and the acidic or basic nature of the material. Organic matter may prevent heat from reaching microorganisms, while acidity or alkalinity may encourage the lethal action of heat.

    ثانيا. Direct Flame:

    Perhaps the most rapid sterilization method is the direct flame method used in the process of incineration. The flame of the Bunsen burner is employed to sterilize the bacteriological loop before removing a sample from a culture tube and after preparing a smear. Flaming the tip of the tube also destroys organisms that happen to contact the tip, while burning away lint and dust.

    In general, objects must be disposable if a flame is used for sterilization. Disposable hospital gowns and certain plastic apparatus are examples of materials that may be incinerated. In past centuries, the bodies of disease victims were burned to prevent spread of the pestilence.

    It is still common practice to incinerate the carcasses of cattle that have died of anthrax and to put the contaminated field to the torch because anthrax spores cannot adequately be destroyed by other means. British law even stipulates that anthrax-contaminated animals may not be autopsied before burning.

    ثالثا. Hot-Air Sterilizer:

    The hot-air-sterilizer utilizes radiating dry heat for sterilization. It is also called hot air oven. It is constructed with three walls and two air spaces. The outer walls are covered with thick asbestos to reduce the radiation of heat. A burner manifold runs along both sides and rear between the outside and the intermediate walls. Convection currents travel a complete circuit through the wall space and interior of the oven, and the products of combustion escape through an opening in the top.

    The hot-air sterilizer is operated at a temperature of 160 to 180°C. (320 to 356°F.) for a period of 1½ hr. If the temperature goes above 180°C., there will be danger of the cotton stoppers charring. Therefore, the thermometer must be watched closely at first until the sterilizer is regulated to the desired temperature. The necessity of watching the sterilizer may be avoided by having the oven equipped with a temperature regulator.

    The effect of dry heat on microorganisms is equivalent to that of baking. The heat changes microbial proteins by oxidation reactions and creates an arid internal environment, thereby burning microorganisms slowly. It is essential that organic matter such as oil or grease films be removed from the materials, because organic matter insulates against dry heat. Moreover, the time required for heat to reach sterilizing temperatures varies among materials. Thus this factor must be considered in determining the total exposure time.

    The hot-air sterilizer is used for sterilizing all kinds of laboratory glassware, such as test tubes, pipettes, Petri dishes, and flasks. In addition, it may be used to sterilize other laboratory materials and equipment that are not burned by the high temperature of the sterilizer. Under no conditions should the hot-air sterilizer be used to sterilize culture media, as the liquids would boil to dryness.

    رابعا. Arnold Sterilizer (Boiling Water):

    Immersion in boiling water is the first of several moist-heat methods that we shall consider. Moist heat penetrates materials much more rapidly than dry heat because water molecules conduct heat better than air. Lower temperatures and less time of exposure are therefore required than for dry heat.

    The Arnold makes use of streaming steam as the sterilizing agent. The sterilizer is built with a quick-steaming base that is automatically supplied with water from an open reservoir. The water passes from the open reservoir, through small apertures, into the steaming base, to which the heat is applied. Since the base contains only a thin layer of water, steam is produced very rapidly. The steam rises through a funnel in the center of the apparatus and passes into the sterilizing chamber.

    Moist heat kills microorganisms by denaturing their proteins. Denaturation involves changes in the chemical or physical properties of proteins. It includes structural alterations due to destruction of the chemical bonds holding proteins in a three-dimensional form.

    As proteins revert to a two-dimensional structure, they coagulate (denature) and become nonfunctional. Egg protein undergoes a similar transformation when it is boiled. You might find a review of the chemical structure of proteins, helpful to your understanding of this process. The coagulation and denaturing of proteins require less energy than oxidation, and therefore , less heat need be applied.

    Sterilization is effected by employing streaming steam at a temperature of approximately 100°C. (212°F.) for a period of 20 min or longer on three consecutive days. The length of the heating period will depend upon the nature of the materials to be treated and the size of the container. Agar, for example, must be first completely melted before recording the beginning of the heating period.

    It must be remembered that a temperature of 100°C. for 20 min. is not sufficient to destroy spores. A much higher temperature is required to effect a complete sterilization in one operation over a relatively short exposure period.

    The principle underlying this method is that the first heating period kills all the vegetative cells present. After a-lapse of 24 hr. in a favourable medium and at a warm temperature, the spores, if present, will germinate into vegetative cells. The second heating will again destroy all vegetative cells.

    It sometimes happens that all spores do not pass into vegetative forms before the second heating period. Therefore, an additional 24-hr. period is allowed to elapse to make sure that all spores have germinated into vegetative cells. It may be seen that unless the spores germinate the method will fail to sterilize.

    v. Fractional Sterilization:

    In the years before development of the autoclave, liquids and other objects were sterilized by exposure to free-flowing steam at 100°C for 30 minutes on each of three successive days. The method was called fractional sterilization because a fraction was accomplished on each day. It was also called tyndallization after its developer, John Tyndall and intermittent sterilization because it was a stop-and-start operation.

    Sterilization by the fractional method is achieved by an interesting series of events. During the first day’s exposure, steam kills virtually all organisms except bacterial spores, and it stimulates spores to germinate to vegetative cells. During overnight incubation the cells multiply and are killed on the second day.

    Again, the material is cooled and the few remaining spores germinate, only to be killed on the third day. Although the method usually results in sterilization, occasions arise when several spores fail to germinate. The method also requires that spores be in a suitable medium for germination, such as a broth.

    Fractional sterilization has assumed importance in modern microbiology with the development of high-technology instrumentation and new chemical substances. Often, these materials cannot be sterilized at autoclave temperatures, or by long periods of boiling or baking, or with chemicals. An instrument that generates free-flowing steam, such as the Arnold sterilizer, is used in these instances.

    vi. Pasteurization:

    Pasteurization is not the same as sterilization. Its purpose is to reduce the bacterial population of a liquid such as milk and to destroy organisms that may cause spoilage and human disease. Spores are not affected by pasteurization.

    One method for milk pasteurization, called the holding method, involves heating at 62.9°C for 30 minutes. Although thermophilic bacteria thrive at this temperature, they are of little consequence because they cannot grow at body temperature.

    For decades, pasteurization has been aimed at destroying Mycobacterium tuberculosis, long considered the most heat-resistance bacterium. More recently, however, attention has shifted to destruction of Coxiella burnetii, the agent of Q fever, because this organism has a higher resistance to heat.

    Two other methods of pasteurization are the flash pasteurization method at 71.6°C for 15 seconds, and the ultra-pasteurization method at 82°C for 3 seconds.

    السابع. Desiccation:

    In addition to freezing, many foods are preserved by desiccation. Water is required for microbial growth. Although lack of available water prevents microbial growth, it does not necessarily accelerate the death rate of microorganisms. Some microorganisms, therefore, can be preserved by drying.

    One can readily purchase active dried yeast for baking purposes and after the addition of water, the yeasts begin to carry out active metabolism. Freeze-drying or lyophilization is a common means of removing water that can be used for preserving microbial cultures. During freeze-drying, water is removed by sublimation. This process generally eliminates damage to microbial cells from the expansion of ice crystals.

    Whereas some microorganisms are relatively resistant to drying, other microorganisms are unable to survive desiccating conditions for even a short period of time. For example, Treponema pallidum, the bacterium that causes syphilis, is extremely sensitive to drying and dies almost instantly in the air or on a dry surface.

    The fact that microorganisms are unable to grow at low water activities can be used for the preservation of many products. Salting was one of the early means of preserving foods and is still employed today. By adding high concentrations of salt, the Aث is lowered sufficiently to prevent the growth of most microorganisms.

    Canvas and other textiles are preserved in temperate zones by the lack of water in the air, but in tropical zones these same materials are subject to bio-deterioration because the humidity is sufficiently high to permit microbial growth. Exposed wood surfaces are often painted to keep the wood dry enough to preclude microbial growth. Many food products are also preserved by drying.

    This preservation method depends on maintaining the product in a dry state, and exposure to high humidity can negate the factor limiting microbial growth and promote microbial spoilage of food products preserved in this manner. If food can be maintained at an Aث value of 0.65 or less, spoilage is unlikely for several years. Products preserved by drying include fruits, vegetables, eggs, cereals, grains, meat, and milk.

    Physical Control by Other Methods:

    Heat is valuable physical agent for controlling microorganisms but sometimes it is important to use. For example, no one would suggest removing the microbial population from a tabletop by using a Bunsen burner, nor can heat-sensitive solutions be subjected to an autoclave. In instances such as these and numerous others, a heat-free method must be used. This section describes some examples.

    Filters came into prominent use in microbiology as interest in viruses grew in the 1890s. Previous to that time, filters had been utilized to trap airborne organisms and sterilize bacteriological media, but now they became essential of filter technology was Charles Chamberland, an associate of Pasteur. His porcelain filter was important to early virus research. Another pioneer was Julius Petri (inventor of the Petri dish), who developed a sand filter to separate bacteria from the air.

    The filter is a mechanical device for removing microorganisms from a solution. As fluid passes through the filter, organisms are trapped in the pores of the filtering material. The solution that drips into the receiving container is decontaminated or, in some cases, sterilized. Filters are used to purify such things as intravenous solutions, bacteriological media, many pharmaceuticals, and beverages.

    Several types of filters are available for use in the microbiology laboratory.

    أنا. Porcelain or Chamberland Filters:

    Porcelain filters are hollow, unglazed cylinders, closed at one end. They are composed of hydrous aluminium silicate or kaolin with the addition of quartz sand and are heated to a temperature sufficiently low to avoid sintering. These filters are prepared in graduated degrees of porosity, from LI to LI3.

    Cylinders having the largest pores are marked LI those having the smallest pores are designated LI3. The finer the pores, the slower will be the rate of filtration. The LI and L2 cylinders are preliminary filters intended for the removal of coarse particles and large bacteria. The L3 filter is probably satisfactory for all types of bacterial filtrations.

    ثانيا. Berkefeld Filters:

    Kieselguhr is a deposit of fine, usually white siliceous powder composed chiefly or wholly of the remains of diatoms. It is also called diatomaceous earth and infusorial earth.

    Berkefeld filters are manufactured in Germany. They are prepared by mixing carefully purified diatomaceous earth with asbestos and organic matter, pressing into cylinder form, and drying. The dried cylinders are heated in an oven to a temperature of about 2000°C. to bind the materials together. The burned cylinders are then machined into the desired shapes and sizes.

    The cylinders are graded as W (dense), N (normal), and V (coarse), depending upon the sizes of the pores. The grading depends upon the rate of flow of pure filtered water under a certain constant pressure.

    ثالثا. Mandler Filters:

    These filters are similar to the Berkefeld type but are manufactured in this country. They are composed of 60 to 80 per cent diatomaceous earth, 10 to 30 per cent asbestos, and 10 to 15 per cent plaster of Paris. The proportions vary, depending upon the sizes of the pores desired. The ingredients are mixed with water, subjected to high pressure, and then baked in ovens to a temperature of 980 to 1650°C. to bind the materials together.

    The finished cylinders are tested by connecting a tube to the nipple of the filter, submerging in water, and passing compressed air to the inside. A gauge records the pressure when air bubbles first appear on the outside of the cylinder in the water. Each cylinder is marked with the air pressure obtained in actual test.

    A convenient arrangement of apparatus for filtering liquids through a Mandler or Berkefeld filter is shown in Fig.3.10. The reduced pressure is indicated by the manometer. The liquid to be filtered is poured into the mantle, and the filtrate is collected in a graduated vessel, from which it may be withdrawn aseptically. Filtration may be interrupted at any time by stopping the vacuum pump and opening the stopcock on the trap bottle to equalize the pressure.

    رابعا. Fritted-Glass Filters:

    Filters of this type are prepared by fritting finely pulverized glass into disk form in a suitable mold. The pulverized glass is heated to a temperature just high enough to cause the particles to become a coherent solid mass, without thoroughly melting, and leaving the disk porous.

    The disk is then carefully fused into a glass funnel and the whole assembled into a filter flask by means of a rubber stopper. Another arrangement is the coupling of the filter to the flask through a ground-glass joint thus eliminating the use of a rubber stopper.

    The filters are marketed in five degrees of porosity as follows: EC (extra coarse), C (coarse), M (medium), F (fine), and UF (ultrafine).

    Bacteriological filters are generally employed under conditions of reduced pressure Bush (1946) recommended filtration through glass filters by the use of positive pressure. Positive pressure not only reduces or eliminates evaporation of the filtrate, but greatly facilitates the interchange of receivers— particularly important in bacteriological filtrations which must be handled aseptically.

    A convenient arrangement is shown in Fig. 3.13. The main body of the filter B contains a fritted-glass disk. A shield A protects the receiver from dust, and a pressure head carries a stopcock. An alternate pressure permits the retention of pressure head C’ contains a built-in mercury manometer. The stopcock on C (C’) permits the retention of pressure after the apparatus is detached from the source of compressed air.

    An ordinary rubber pressure bulb is satisfactory for producing pressures up to at least 450 mm. Mercury. If the ground-glass joints are well lubricated and the parts held together with strong rubber bands or springs, the apparatus should hold this pressure for days.

    v. Asbestos Filters:

    The best-known filter employing asbestos as the filtering medium is the Seitz filter. The asbestos is pressed together into thin disks and tightly clamped between two smooth metal rims by means of three screw clamps. The liquid to be filtered is poured into the metal apparatus, in which the asbestos disk is clamped, and the solution drawn through by vaccum, the filtering disks are capable of effectively retaining bacteria and other particulate matter.

    At the end of the operation, the asbestos disk is removed, a new one inserted, and the assembled filter sterilized. This feature makes the Seitz filter very convenient to use, since no preliminary cleaning is necessary.

    A modification of the Seitz filter, utilizing centrifugal force instead of suction or pressure, has been suggested by Boerner. The filter consists of a cylinder and a funnel-shaped part with stem, which holds the filter pad supported on a wire gauze disk. The cylinder screws into the funnel with the filter disk pressed between them.

    The assembled filter fits closely into the top of a 15-ml. metal centrifuge tube, with the knurled collar of the funnel portion resting on the top of the metal tube. The filtrate is collected in a glass tube inside the cup. The filter can also be used for vacuum filtration in the conventional manner by inserting the stem through a rubber stopper fitted to a filter flask.

    vi. Jenkins Filter:

    This filter consists of a metal mantle holding a soft rubber sleeve and a porcelain filter block. The porcelain block is held in the rubber sleeve and made watertight by screwing together two metal parts. The filter block is not fragile. It is washed after each use, dried, and inserted in the mantle. The mantle is fitted with a rubber stopper, wrapped in paper, and sterilized in an autoclave.

    The filter is designed to be used for the sterilization of small quantities of liquids.

    السابع. Ultrafilter:

    Ultrafiltration generally means the separation of colloidal particles from their solvents and from crystalloids by means of jelly filters known a ultrafilter.

    The early jelly filters were composed of gelatin and of silicic acid, but these have been replaced by collodion in membrane or sac form, or collodion deposited in a porous supporting structure. The supporting structure may be filter paper in sheet and thimble form, unglazed porcelain dishes and crucibles, Buchner funnels, filter cylinders, etc.

    ثامنا. Membrane Filter:

    The membrane filter is a third type of filter that has received broad acceptance. It consists of a pad of organic compounds such as cellulose acetate or polycarbonate, mounted in a holding device. This filter is particularly valuable because bacteria multiply and form colonies on the filter pad when the pad is placed on a plate of culture medium.

    Microbiologists can then count the colonies to determine the number of bacteria originally present. For example, if a 100-ml sample of liquid were filtered and 59 colonies appeared on the pad after incubation, it could be assumed that 59 bacteria were in the sample.

    ix. Cleaning Filters:

    Some filters are discarded after each use and new ones employed others are intended to be cleaned after each filtration and, with proper care, may be used repeatedly. Collodion membranes are easily prepared, and the Seitz asbestos disks are relatively low in cost. These filters are intended to be used once, then discarded. On the other hand, porcelain, diatomaceous earth, and fritted-glass filters are too expensive to be used only once, but are easily cleaned.

    Porcelain filters are cleaned by placing them in a muffle furnace and raising the temperatures to a red heat. This burns the organic matter in the pores and restores the filters to their original condition.

    Filters of the Berkefeld and Mandler types are cleaned by placing the cylinders in a special metal holder connected to a faucet. The flow of water is reversed by passing through the cylinder from within outward. This should be continued until all foreign matter has been washed away from the filter pores.

    Albuminous or similar materials remaining in the pores of the filters are likely to be coagulated by heat during the process of sterilization, with the result that the filters will be clogged. Filters in this condition are useless for further work.

    Clogged filters may be cleaned in various ways but probably most conveniently by continuous suction of full-strength Clorox, or similar solution, for 5 to 15 min. This treatment quickly dissolves the coagulated material and restores the usefulness of the filter. Thorough washing is necessary to remove the last traces of the oxidizing solution.

    Fritted-glass filters may be cleaned by treatment with concentrated sulfuric acid containing sodium nitrate. The strong acid quickly oxidizes and dissolves the organic matter. Thorough washing is necessary to remove the last traces of acid.

    2. Radiation Method:

    أنا. Sterilization by Ultraviolet Light:

    Visible light is a type of radiant energy detected by the sensitive cells of the eye. The wavelength of this energy is between 400 and 800 nanometers (nm). Other types of radiations have wavelengths longer or shorter than that of visible light and therefore, they cannot be detected by the human eye.

    One type of radiant energy, ultraviolet light, is useful for controlling microorganisms. Ultraviolet light has a wavelength between 100 and 400 nm, with the energy at about 265 nm most destructive to bacteria. When microorganisms are subjected to ultraviolet light, cellular DNA absorbs the energy, and adjacent thymine molecules link together.

    Linked thymine molecules are unable to position adenine on messenger RNA molecules during the process of protein synthesis. Moreover, replication of the chromosome in binary fission is impaired. The damaged organism can no longer produce critical proteins or reproduce, and it dies quickly.

    Ultraviolet light effectively reduces the microbial population where direct exposure takes place. It is used to limit airborne or surface contamination in a hospital room, morgue, pharmacy, toilet facility, or food service operation. It is noteworthy that ultraviolet light from the sun may be an important factor in controlling microorganisms in the air and upper layers of the soil, but it may not be effective against all bacterial spores. Ultraviolet light does not penetrate liquids or solids, and it may cause damage in human skin cells.

    ثانيا. Ionizing Radiation:

    High-energy, short wavelength radiation disrupts DNA molecules, and exposure to short wavelength radiations may cause mutations, many of which are lethal. Exposure to gamma radiation (short wavelengths of 10 -3 – 10 -1 nanometers), X ray (wavelengths of 10 -3 – 10 2 nanometers), and ultraviolet radiation (ultraviolet light with wavelengths of 100-400 nanometers) increases the death rate of microorganisms and is used in various sterilization procedures to kill microorganisms. Viruses as well as other microorganisms are inactivated by exposure to ionizing radiation.

    Sensitivities to ionizing radiation vary. Resistance to ionizing radiation is based on the biochemical constituents of a given microorganism. Non-reproducing (dormant) stages of microorganisms tend to be more resistant to radiation than are growing organisms. For example, endospores are more resistant than are the vegetative cells of many bacterial species.

    Exposure to 0.3-0.4 Mrads (million units of radiation) is necessary to cause a tenfold reduction in the number of viable bacterial endospores. An exception is the bacterium Micrococcus radiodurans, which is particularly resistant to exposure to ionizing radiation.

    Vegetative cells of M. radiodurans tolerate as much as 1 Mrad of exposure to ionizing radiation with no reduction in viable count. It appears that efficient DNA repair mechanisms are responsible for the high degree of resistance to radiation exhibited by this bacterium.

    Ionizing radiation is used to pasteurize or sterilize some products. Some commercially produced plastic petri plates are sterilized by exposure to gamma radiation. Most sterilization procedures involving exposure to radiation employ gamma radiation from cobalt-60 or cesium-137.

    Bacon, for example, can be sterilized by radappertization, a process of sterilizing foods by exposure to radiation, using radiation doses of 4.5-5.6 Mrads. Hadurization, functionally equivalent to pasteurization, is used to kill non-spore-forming human pathogens that may be present in food. Radurization can be used to increase the shelf life of sea-foods, vegetables, and fruits.

    Unlike gamma radiation, ultraviolet light does not have high penetrating power and is useful for killing microorganisms only on or near the surface of clear solutions. The strongest germicidal wavelength of 260 nanometers coincides with the absorption maxima of DNA, suggesting that the principle mechanism by which ultraviolet light exerts its lethal effect is through the disruption of the DNA. In fact, ultraviolet light causes the formation of covalently linked thymine dimers within the DNA in place of the normal thymine-adenine hydrogen bonded base pairs.

    Microorganisms have enzymes that can repair the alterations in the DNA caused by exposure to ultraviolet light. The photo-reactivation enzymes require exposure to light in the visible spectrum. Exposure to ultraviolet light sometimes is used to maintain the sterility of some surfaces. In some hospitals bench-tops are maintained bacteria-free when not in use by using an ultraviolet lamp.

    The dangers involved in human exposure to excess ultraviolet radiation, which include blindness if an ultraviolet light is viewed directly, have led to the use of alternative methods for maintaining the sterility of such areas.

    Like ultraviolet radiation, long wavelength infrared radiation (103-105 nanometers) and microwave radiations (wavelengths greater than 106 nanometers) have poor penetrating power. Infrared and microwave radiations do not appear to kill microorganisms directly. Absorption of such long wavelength radiation, however, results in increased temperature.

    Exposure to infrared or microwave radiations can thus indirectly kill microorganisms by exposing them to temperatures that are higher than their maximal growth temperatures. Because microwaves generally do not kill microorganisms directly, there is some concern in the food industry that cooking with microwave ovens may not adequately kill microorganisms contaminating food products.

    3. Ultrasonic Method:

    Ultrasonic Vibrations:

    Ultrasonic vibrations are high-frequency sound waves beyond the range of the human ear. When directed against environment surfaces, they have little value because air particles deflect and disperse the vibrations. However, when propagated in fluids, ultrasonic vibrations cause the formation of microscopic bubbles, or cavities, and the water appears to boil. Some observers call this “cold boiling.”

    The cavities rapidly collapse, and send out shock waves. Microorganisms in the fluid are quickly disintegrated by the external pressures. The formation and implosion of the cavities is known as cavitation.

    Ultrasonic vibrations are valuable in research for breaking open tissue cells and obtaining their parts for study. A device called the cavitron is used by dentists to clean teeth, and ultrasonic machines are available for cleaning dental plates, jewelry, and coins. A major appliance company has also experimented with an ultrasonic washing machine.

    As a sterilizing agent, ultrasonic vibrations have received minimal attention because liquid is required and other methods are more efficient. However, many research laboratories use ultrasonic probes for cell disruption and hospitals use ultrasonic devices to clean their instruments. When used with an effective germicide, an ultrasonic device may achieve sterilization, but the current trend is to use ultrasonic vibrations as a cleaning agent and follow the process by sterilization in autoclave.

    4. Chemical Method:

    أنا. Preservation Methods:

    Over the course of many centuries, various physical methods have evolved for controlling microorganisms in food. Though valuable for preventing the spread of infectious agents, these procedures are used principally to retard spoilage and prolong the shelf life of foods, rather than for sterilization.

    Drying is useful in the preservation of various metals, fish, cereals, and other foods. Since water is a necessary requisite for life, it follows that where there is no water, there is virtually no life. Many of the foods in the kitchen pantry typify this principle. One example is discussed in MicroFocus.

    Preservation by salting is based upon the principle of osmotic pressure. When food is salted, water diffuses out of microorganisms to the higher salt concentration and lower water concentration in the surrounding environment. This flow of water, called osmosis, leaves microorganisms to shrivel and die.

    The same phenomenon occurs in highly sugared foods such as syrups, jams, and jellies. However, fungal contamination may remain at the surface because aerobic molds tolerate high sugar concentrations.

    Low temperatures found in the refrigerator and freezer retard spoilage by reducing the rate of metabolism in microorganisms and, consequently, reducing their rate of growth. Spoilage is not totally eliminated in cold foods, however, and many microorganisms remain alive, even at freezer temperatures. These organisms multiply rapidly when food thaws, which is why prompt cooking is recommended.

    Note in these examples that there are significant differences between killing microorganisms, holding them in check, and reducing their numbers. The preservation methods are described as bacteriostatic because they prevent the further multiplication of bacteria.

    ثانيا. Gaseous Sterilization:

    Heat sterilization is mostly unstable for thermolabile solid medicament and thermolabile equipment including articles of plastics, delicate rubber items. Because of high capital cost and use of elaborate precautionary measures, the radiation method which is one of the methods of sterilization has become unpopular.

    Thus the sterilization of such materials with a chemical in gaseous state finds a greater application. Previously formaldehyde was widely used, but at present ethylene oxide is the only compound of outstanding importance in pharmaceutical and medical fields.


    Autoclave Procedure

    Wear personal protective equipment:

    • Lab coat
    • Eye protection
    • Closed-toe shoes
    • Heat-resistant gloves to remove items, especially hot glassware

    Packaging and Loading

    • Only designated individuals should be allowed to set and/or change parameters for the autoclaves.
    • Before using the autoclave, check inside for any items left by the previous user that could pose a hazard.
    • Clean the drain strainer before loading the autoclave.
    • Always place items in a secondary container.
    • Do not overload or package bags too tightly. Leave sufficient room for steam circulation. If necessary, place container on its side to maximize steam penetration and avoid entrapment of air.
    • Use only autoclavable bags to package waste.
    • Do not allow bags to touch the interior walls of the autoclave to avoid melting of plastic.
    • Ensure sufficient liquid is packed with contents of autoclave bags if dry.
    • Place soiled glassware and lab ware in secondary containers and autoclave them in the solids cycle. Do not fill containers more than 2/3 full with liquids. Loosen caps or use vented closures.
    • In case of clean glassware and wrapped instruments, lay them in a secondary container before autoclaving in wrapped goods cycle.
    • For secondary containment, use autoclave trays made out of polypropylene, polycarbonate or stainless steel. The trays should have a solid bottom and sides to contain the contents and catch spills.
    • Choose appropriate cycle for the material. Incorrect selection of cycle may damage the autoclave, cause liquid to boil over or bottles to break.
    • Start your cycle and fill out the autoclave user log. A completed cycle usually takes between 1 to 1.5 hours.
    • Check chamber/jacket pressure gauge for minimum pressure of 20 pounds per square inch (psi).
    • Close and lock door.
    • Check temperature for 250⁰F (121⁰C) every load.
    • Do not attempt to open the door while autoclave is operating.

    التفريغ

    • Ensure cycle has completed and both temperature and pressure have returned to a safe range.
    • Wear PPE described above, plus an apron and face shield if removing liquids. Stand back from the door as a precaution and carefully open door no more than 1 inch. This will release residual steam and allow pressure within liquids and containers to normalize.
    • Allow the autoclaved load to stand for 10 minutes in the chamber. This will allow steam to clear and trapped air to escape from hot liquids, reducing risk to operator.
    • Do not agitate containers of super-heated liquids or remove caps before unloading.
    • Place liquids in an area which clearly indicates the items are “hot” until the items cool to room temp.
    • Allow autoclaved materials to cool to room temperature before transporting. Never transport superheated materials.
    • Place cooled autoclaved biohazard bag into regulated medical waste box. Autoclaved infectious liquids may be disposed of into the sanitary sewer.

    What is Sterile? Find Your Way around a Sterile Tissue Culture Hood

    You’ve been told that maintaining a sterile environment in a tissue culture hood is vital to preventing contamination of cell cultures. But what exactly is meant by sterile? The definition of sterile is ‘completely clean, sanitized, and free of all forms of life’. Obviously you still want your cells and/or any other organisms you are studying to live, but any reagents or equipment that are used for tissue culture should be sterile. A better word for how you want to work in the hood is asepsis, or the state of being free from biological contaminants. Aseptic technique will ensure that only the things you want to grow in your culture will. If you are mindful of sources of contamination and work carefully, then you will be able to work effectively in a tissue culture hood. Below are several tips for good aseptic technique.

    Plan your experiments. Plan your experiments ahead of time so you can make sure that you have time to sterilize all reagents and equipment. Make a list of everything you will need in the hood to minimize leaving the hood during your experiment. Set up your hood with everything needed for the experiment prior to starting your work.

    Be good go your hood. A clean, functioning tissue culture hood is critical for aseptic work. Make sure you know how to use the hood properly. If you have questions you can start by reading Bitesize Bio’s Quick Protocol and Ways to Abuse Biological Safety Cabinets. A qualified technician should certify the hood annually, and a sticker on the hood should indicate certification. Take apart and deep clean the hood about twice a year. Take out all removable parts, clean with disinfectant and sterilize in the autoclave. Every time you turn the hood on, make sure the fan is working properly by reading the magnahelic gauge (Figure 1). Clean the hood with disinfectant before and after every experiment. If you spill something, clean it up as soon as you can without compromising your experiment. This includes checking and cleaning the drip pans if large amounts of liquid are spilled. Do not store unnecessary equipment or reagents in the hood: this will make it harder to keep the hood clean.

    Figure 1. A Magnahelic Gauge

    Start clean. Make sure everything you bring into the hood is clean. Sterilize or sterile filter (with a 0.22micron filter) all media and reagents. Designate store bought reagents for tissue culture use only. Sterilize or disinfectant all equipment used in the hood. Remember to spray the outside of all bottles with disinfectant prior to placing them in the hood. Prior to starting your work, wash your hands well, put on clean gloves and make sure your clothing does not bring in unwanted organisms. Many labs designate lab coats for tissue culture use. If you use a lab coat, make sure it is cleaned on a regular basis.

    Work from clean to dirty. This concept should be used throughout your day as you move from experiment to experiment, and as you work on each experiment within the hood. Plan your day so that you do your clean experiments first and your dirty experiments later on. For example, I usually split cells for maintaining cell lines in the morning then do any work infecting tissue culture cells with viruses in the afternoon. Within the hood I usually designate the right side of the hood my “clean” side and the left side my “dirty” side. As much as possible I work from the clean side over to the dirty side.

    Don’t trap things with your trap. If you use a vacuum trap for removing large amounts of liquid, make sure you take care of the trap. On a regular basis inspect all hoses and lines to make sure nothing is growing in them. Clean the outside of all hoses and lines within the hood with disinfectant before and after every experiment. If the vacuum hose is stored in the hood, make sure liquid is not dripping out of the hose into the hood when the vacuum is turned off. Do not allow the trap to overfill. Empty and clean the collection flask on a regular basis, preferably at the end of your experiment. If the vacuum hoses are connected to a filter, check the filter when you empty the flask to make sure it is not wet replace the filter as needed.

    Knowing how to find your way around a tissue culture hood using aseptic technique will prevent contamination of your experiments with unwanted organisms. Follow these tips and you will have a good start!


    شاهد الفيديو: هاااام جدااا - شرح كامل وملخص عن قسم التعقيم المركزي - CSSD DEPAERTMENT (أغسطس 2022).